本发明公开了一种利用肽配基亲和纯化凝血因子VIII的方法，该方法选用了对人凝血因子Ⅷ的特异性的肽配基作为亲和基质，并将该特异性的肽配基固定在琼脂糖凝胶载体上，实现凝血因子Ⅷ的快速、特异、高效纯化。其中，所述肽配基为能与凝血因子VIII发生亲和反应的多肽；所述多肽为EYCPC、GCVSGCLCWEYC和RKWNCTDHEYC中的任意一种或者EYCPC、GCVSGCLCWEYC和RKWNCTDHEYC按任意比混合后得到的混合物。利用该方法得到的凝血因子VIII的得率高、比活高，可以实现凝血因子Ⅷ的规模化纯化与制备。

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