本发明涉及一种通过CRISPR/Cas9系统快速获得大片段缺失的细胞系基因敲除方法，属于基因工程和遗传修饰领域。本发明改造pX458载体，使其带有DsRed2和ECFP，然后针对目标基因设计多个特异性的sgRNA位点，将其连接至改造载体中，转染细胞系后利用流式细胞仪对细胞群进行分选，可以非常快速获得基因组被编辑的单细胞，然后用PCR扩增单细胞DNA序列，通过凝胶电泳即可以从中挑选出具有大片段缺失的单细胞。本发明通过将CRISPR/Cas9系统、流式细胞仪单细胞分选和表达载体上的荧光蛋白筛选三者结合起来，可以在短时间内获得具有大片段缺失的阳性单克隆，极大地提高细胞系基因敲除工作效率。

保障一：对于在本平台交易的交易品，均由我平台验证交易品的有效性；

保障二：客户通过本平台交易，由我平台核实并确保买卖双方身份信息真实有效；

保障三：通过本平台交易，买家支付交易款项给本平台，由本平台监控交易流程，待确认交易完成后支付交易款项给卖家，全程资金代管，保障买卖双方资金安全；

保障四：通过本平台交易，由我平台代办国家手续，办理过程公开透明，进度随时查询，确保交易真实可靠。