本发明公开了一种用于检测与结直肠癌长春新碱耐药相关的miRNA表达的引物、试剂盒、方法及应用,属于肿瘤生物治疗技术领域。本发明首次通过试验证实SEQ ID NO:1所示miRNA序列与长春新碱的耐药性相关,miRNA在长春新碱耐药细胞中高表达、敏感细胞中低表达,因此可以作为肿瘤细胞长春新碱耐药的标志物。根据该标志物设计的引物、试剂盒及检测方法可用于临床判断肿瘤细胞对长春新碱的耐药性,进一步指导临床用药并实现精准治疗,提高疗效,降低副作用。本发明为设计肿瘤细胞长春新碱耐药药物提供了新的靶点,可用于直接开发拮抗肿瘤细胞长春新碱耐药性的药物。